EYKuzmina

Начальные этапы конструирования штамма-продуцента белка интерналина для последующего создания тест-системы к листериозу

Listeria monocytogenes — грамположительная подвижная палочка, которая вызывает одно из самых тяжелых заболеваний пищевого происхождения – листериоз. Бактерия прекрасно сохраняется в контаминированных молочных и мясных продуктах. При отсутствии должной термической обработки она способна вызвать тяжелые поражения желудочно-кишечного тракта. Благодаря изменчивости, свойственной листериям, бактерия приобретает устойчивость к широкому спектру антибиотиков, обработке ультрафиолетом и другим внешним факторам. L-формы бактерий способны паразитировать внутриклеточно, что обуславливает затяжное и хроническое протекание заболевания, а также периодическую неэффективность антибиотикотерапии. Особенно смертность от листериоза высока среди людей группы риска – пожилых, беременных, а также людей с иммунодефицитом, у которых инвазивная форма инфекции может приводит к полиорганной недостаточности. В связи со сказанным выше успешная детекция L. monocytogenes как в контаминированных продуктах, так и у пациентов является актуальной до сих пор.

В качестве мишеней тест-систем обычно используют факторы вирулентности возбудителей инфекции. Листерия обладает множеством факторов вирулентности, которые позволяют ей заражать, выживать и размножаться в различных типах клеток-хозяев. Факторы вирулентности L. monocytogenes включают два поверхностных белка - интерналин А (inlA) и интерналин В (inlB), которые способствуют поглощению бактерий клетками-хозяевами, и секретируют порообразующий токсин листериолизин O (LLO), обеспечивающий пролиферацию бактерий в цитозоле. Проблемой на начальном этапе разработки тест-системы является выбор антигена-мишени, от которого зависит удачный исход всего проекта. Так как InlA способствует как прикреплению бактерий, так и их интернализации в клетках, которые экспрессируют его рецептор Е-кадгерин, он стал объектом нашего исследования исследования.

В связи со сказанным выше целью исследования является начальная разработка тест-системы к L. monocytogenes.

Для достижения цели были поставлены следующие задачи:
1. Изучение литературных данных и описание следующих вопросов:
• L. monocytogenes как возбудитель сапронозной инфекции, особенности жизненного цикла бактерии
• Диагностические тест-системы на основе поликлональных антител
2. Проектирование тест-системы
3. Получение экспрессирующей pET28 плазмиды с геном InlA для последующего клонирования в штамм-продуцент.

Данная работа является частью крупной работы, целью которой является создание тест-системы для листериоза.

Фото автора: 
Год реализации исследования: 

Материалы по проекту